SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86093-01(10×100ul)/BFNC86093-02(50×100ul)

SHuffle T7 E. coli：                                           100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                   -80℃（6個(gè)月）

基因型

F′ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (Spec^R, laclq) ΔtrxBrpsL150(Str^R)Δgor Δ(malF)3

產(chǎn)品說(shuō)明

SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個(gè)拷貝的二硫鍵異構酶 DsbC基因 ，可以促進(jìn)含有二硫鍵蛋白的正確折疊；此外DsbC還是一個(gè)分子伴侶，可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊，形成正確構象，同時(shí)該菌株可降低目的基因的本底表達，適合于毒性基因的原核表達。SHuffle T7 E. coli菌株染色體中整合了一個(gè)拷貝的T7 RNA 聚合酶基因，可以表達噬菌體T7 RNA聚合酶，適合于T7啟動(dòng)子誘導的蛋白表達；該菌株還可以表達大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。SHuffle T7 E. coli菌株具有抗T1 噬菌體感染的特點(diǎn)，具有鏈霉素，壯觀(guān)霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無(wú)菌培養液，37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

3. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-10 mM均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。

5. SHuffle T7 E. coli 菌株具有鏈霉素，壯觀(guān)霉素抗性，不可用于具有鏈霉素，壯觀(guān)霉素抗性質(zhì)粒的轉化。