白介素elisa試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素，再與HRP標記的白介素抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。

 

　　白介素elisa試劑盒的計算：

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　試劑盒性能：

　　1、樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.990以上。

　　2、批內與批見(jiàn)應分別小于9%和11%。

 

　　血清elisa試劑盒的操作流程如下：

　　1、血清總補體ELISA試劑盒待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個(gè)平行孔；設兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個(gè)空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　2、酶標板置4℃，包被過(guò)夜。

　　3、洗板：吸干孔內反應液，產(chǎn)品僅用于科研用洗滌液過(guò)洗一遍，之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　5、酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　6、洗板，同(4)。

　　7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　　8、酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　9、洗板，同(4)。

　　10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

　　12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　13、數據處理：在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標準。