elisa是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。

 

　　在檢測時(shí)，受檢標本與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過(guò)反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

 

　　elisa實(shí)驗的原理：

　　1、包被：抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反應等免疫活性；

　　2、標記：抗原或者抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接成酶結合物而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn)；

　　3、顯色：酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或抗體結合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現顯色反應，根據反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。

 

　　elisa實(shí)驗步驟：

　　1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標板孔數目，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2、標準品和樣本加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白孔不加。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3、加酶：標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔。

　　4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

　　5、配液：將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。

　　6、洗滌：小心揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次。

　　7、顯色：每孔加入底物A、B各50μL，輕輕震蕩混勻后，37℃避光孵育15min。

　　8、終止：每孔加入終止液50μL，終止反應，此時(shí)藍色立刻轉為黃色。

　　9、測定：以空白孔調零，15分鐘內在450nm波長(cháng)處測定各孔的吸光度（OD值）。