BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86068-01(10×100ul)/BFNC86068-02(50×100ul)

BL21(DE3)pLysS：                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr

產(chǎn)品說(shuō)明

BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達，適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)。青旗生物生產(chǎn)的BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率高達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

氯霉素

Chloramphenicol  34 mg/ml in ethanol. Store at -20℃. Use at 34 µg/ml.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。

6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復蘇培養基為無(wú)抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。