2、腦脊液:前處理有必要把細胞離心去掉,每孔直接加100μl即可。假定濃度太高需稀釋時(shí),用標準品稀釋液直接稀釋?zhuān)?/div>
3、血清血漿:請參與50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量參與,缺少部分用標準品稀釋液賠償至100ul;
4、組織勻漿液的樣本,要制備過(guò)程中需要在緩沖液中參與蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解,構成查看效果的值偏低。
上海elisa試劑盒的實(shí)驗操作步驟:
1、把試劑混勻,切記實(shí)驗時(shí)不要加理大量含有泡沫的液體,避免實(shí)驗產(chǎn)生誤差。
2、跟數據測樣決定板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定,能使用復孔的盡量做復孔。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔 加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4、甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7、每孔加入底物各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。一定要避免光照。
8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9、在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。