EPI300化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86024-01(10×100ul)/BFNC86024-02(50×100ul)

EPI300:                                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                         -80℃（6個(gè)月）

基因型

F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr.

產(chǎn)品說(shuō)明

EPI300細胞含有一個(gè)突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁，誘導劑Ⅰ可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復制子質(zhì)粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養基中生長(cháng)時(shí)，trfA基因的表達被抑制，ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數維持在很低的水平；當在培養基中加入誘導劑Ⅰ，ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳動(dòng)物基因組DNA）。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI300可用于藍白斑篩選，rpsL賦予其鏈霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的EPI300感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達3×10⁸cfu/μg DNA。

EPI300化學(xué)感受態(tài)細胞

操作方法

1. EPI300感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或

   LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。