發(fā)布時(shí)間： 2023-09-24 點(diǎn)擊次數： 1266次
elisa（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一種常用于生物分子檢測與定量分析的實(shí)驗技術(shù)。它通過(guò)利用酶標記的抗體與特定目標物相互作用，再通過(guò)酶促反應產(chǎn)生的顏色變化來(lái)定量測量目標物的存在量。下面將介紹elisa實(shí)驗的基本步驟。
第一步：涂覆抗原
將待檢測的抗原或抗原相關(guān)的分子均勻地涂覆在微孔板的孔底表面上。這個(gè)抗原可以是蛋白質(zhì)、多肽、糖類(lèi)等生物分子。
第二步：阻斷
為了防止非特異性的背景信號，需要在涂覆抗原后加入阻斷劑，例如牛血清蛋白（BSA）或牛奶粉，來(lái)覆蓋微孔板上未被涂覆的表面。
第三步：加入樣品和對照
加入待檢測的樣品或標準溶液到微孔板中，同時(shí)設立陽(yáng)性對照和陰性對照。陽(yáng)性對照含有已知濃度的目標物，而陰性對照則不含目標物。
第四步：孵育
將微孔板蓋上，置于恒溫箱或孵化器中，在適當的溫度下進(jìn)行孵育。孵育的目的是讓待檢測樣品中的目標物與已涂覆在孔底上的抗原相互結合。
第五步：洗滌
在孵育結束后，使用洗滌緩沖液反復洗滌微孔板，以去除未結合的樣品和非特異性的成分。
第六步：加入檢測抗體
加入酶標記的檢測抗體，該抗體能與目標物形成免疫復合物。該抗體一般與酶（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）標記結合，以便在后續步驟中通過(guò)酶促反應來(lái)檢測目標物的存在。
第七步：再次洗滌
用洗滌緩沖液洗滌微孔板，去除未結合的檢測抗體。
第八步：加入底物
加入適當的底物溶液，底物會(huì )與酶發(fā)生反應，并在酶的作用下產(chǎn)生可見(jiàn)的顏色。底物的種類(lèi)和酶的選擇取決于所使用的檢測方法和設備。
第九步：反應停止
通過(guò)加入一種停止液或改變反應條件，停止底物的反應。這將阻止顏色的繼續發(fā)展，并固定目標物的信號。
第十步：測量與分析
使用光譜儀、酶標儀等設備對微孔板中各孔的顏色強度進(jìn)行測量。利用已建立的標準曲線(xiàn)，可以根據樣品的顏色強度確定目標物的濃度。
elisa實(shí)驗是一種常用的生物分子檢測和定量分析方法，廣泛應用于醫學(xué)診斷、生物學(xué)研究、藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。通過(guò)合理的實(shí)驗設計和嚴格的操作，elisa實(shí)驗可以提供可靠、準確的生物分子定量結果，為科學(xué)研究和醫學(xué)診斷提供有力支持。
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