Mach1-T1化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86005-01(20×100ul)/BFNC86005-02(100×100ul)

Mach1-T1:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                 -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(r_K^- m_K⁺) ΔrecA1398 endA1 tonA

產(chǎn)品說(shuō)明

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來(lái)，是目前生長(cháng)速度較快的感受態(tài)細胞之一，在平板上 8h可見(jiàn)克隆，缺失核酸內切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。

青旗生物生產(chǎn)的Mach1-T1感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. Mach1-T1感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13小時(shí)。

Mach1-T1化學(xué)感受態(tài)細胞

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。