目前常用的感受態(tài)細胞制備方法有CaCl2和RbCl（KCl）法，RbCl（KCl）法制備的感受態(tài)細胞轉化效率較高，但CaCl2 法簡(jiǎn)便易行，且其轉化效率*可以滿(mǎn)足一般實(shí)驗的要求，制備出的感受態(tài)細胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入占總體積15％的無(wú)菌甘油于-70℃保存（半年），因此 CaCl2法為使用更廣泛。

 

　　感受態(tài)細胞的操作方法：

　　1、DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

　　2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

　　3、向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

　　4、5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

　　5、將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時(shí)。

 

　　注意事項：

　　1、感受態(tài)的細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

　　2、混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應輕柔操作。

　　3、轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。