克隆感受態(tài)細胞主要采用理化方法誘導細胞，吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來(lái)DNA的生理狀態(tài)。它的主要原理就是通過(guò)處理使細胞的通透性變大，直觀(guān)的說(shuō)，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進(jìn)入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動(dòng)性，這種孔洞會(huì )被細胞自身所修復。

 

　　克隆感受態(tài)細胞操作方法：

　　1、DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰中靜置25分鐘；

　　2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率；

　　3、向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘；

　　4、5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上；

　　5、將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時(shí)。

 

　　注意事項：

　　1、感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率；

　　2、混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應輕柔操作；

　　3、轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。