驗收細胞注意事項

1、收到大鼠骨骼肌成肌細胞；L6細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。

2、收到大鼠骨骼肌成肌細胞；L6細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀(guān)察細胞。,由于運輸過(guò)程中的問(wèn)題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀(guān)察會(huì )出現細胞懸浮的情況，出現此狀態(tài)時(shí)，請不要打開(kāi)細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止 3-5 小時(shí)左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀(guān)察，此時(shí)多數細胞會(huì )重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實(shí)細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到大鼠骨骼肌成肌細胞；L6細胞后，請鏡下觀(guān)察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個(gè)新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時(shí) 血清濃度可以加到 15％去培養。若細胞迏到 80%左右 ，血清濃度還是在 10％。

4、收到大鼠骨骼肌成肌細胞；L6細胞時(shí)如無(wú)異常情況 ，請在顯微鏡下觀(guān)察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養瓶中培養基吸出，留下 5-10ML 培養基繼續培養：超過(guò) 80%匯合度時(shí)，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000 轉/分鐘離心 3 分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

5、將培養瓶置于 37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以備不時(shí)之需。

6、24 小時(shí)后，大鼠骨骼肌成肌細胞；L6細胞形態(tài)已恢復并貼滿(mǎn)瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細胞生長(cháng)面為準）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細胞為準，一般 1-3 分鐘，不超過(guò) 5 分鐘?？梢苑湃?7℃培養箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細胞脫落下來(lái)，加入 3-5ml 培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(cháng)較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞 ，懸浮細胞。嚴格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2 培養。

特別提醒： 原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。