M15(pREP4)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86088-01(10×100ul)/BFNC86088-02(50×100ul)

M15(pREP4)：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                   -80℃（6個(gè)月）

基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR

產(chǎn)品說(shuō)明

M15(pREP4)蛋白表達菌株含有pREP4質(zhì)粒，該質(zhì)粒通過(guò)p15A復制子啟動(dòng)復制，可以與許多原核表達質(zhì)粒共存于同一大腸桿菌細胞中；同時(shí)該質(zhì)粒攜帶lac I基因，可高效表達lac 抑制蛋白，在IPTG誘導前可抑制目標蛋白的本底表達，特別適合毒性基因的表達。M15(pREP4)菌株是PQE系列質(zhì)粒的配套菌株，特別適合PQE系列質(zhì)?；蛴蒃.coli T5 啟動(dòng)子誘導表達的質(zhì)粒的蛋白表達。pREP4質(zhì)粒賦予該菌株卡那霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的M15(pREP4)感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達2×10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. M15(pREP4)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上（若質(zhì)粒濃度較高，也可稀釋后涂板，務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落）。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養，M15(pREP4)菌株在平板或液體培養基中生長(cháng)時(shí)，需在培養基中加入終濃度為35ug/ml的卡那霉素。

M15(pREP4)感受態(tài)細胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液體培養基中生長(cháng)時(shí)，需在培養基中加入終濃度為35ug/ml的卡那霉素。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。