Tuner(DE3)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86083-01(10×100ul)/BFNC86083-02(50×100ul)

Tuner(DE3)：                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)

產(chǎn)品說(shuō)明

Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株，此突變導致IPTG以均一速度進(jìn)入體系中大腸桿菌的每個(gè)細胞，產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴(lài)。此菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達載體 (如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區整合于Tuner的染色體上，所以稱(chēng)為T(mén)uner(DE3)，可同時(shí)表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。

青旗生物生產(chǎn)的Tuner(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1.Tuner(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

Tuner(DE3)感受態(tài)細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。