OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86078-01(10×100ul)/BFNC86078-02(50×100ul)

OrigamiB(DE3)：                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)

產(chǎn)品說(shuō)明

OrigamiB(DE3)菌株包含突變的硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表達主要還原途徑的兩個(gè)關(guān)鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。 該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶），可同時(shí)表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達，具有卡那霉素和四環(huán)素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的表達。

青旗生物生產(chǎn)的OrigamiB (DE3) 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Origami B (DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.  

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。Origami B(DE3) Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的表達.