BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規格CAT#: BFNC86071-01(10×100ul)/BFNC86071-02(50×100ul)

BL21 Star(DE3)pLysS：                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (Cam^R)

產(chǎn)品說(shuō)明

BL21 Star(DE3)pLysS菌株來(lái)源于BL21(DE3)，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE基因的突變降低了內源RNase的積累，增強菌株細胞內mRNA的穩定性，從而提高異源蛋白的表達水平。主要適用于T7啟動(dòng)子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達，同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動(dòng)子表達載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎表達水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達。BL21 Star(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7 RNA聚合酶結合抑制其轉錄活性，進(jìn)而降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。pLysS質(zhì)粒含有p15A復制起始子，可以和含有 pUC或pBR322等復制起始子的質(zhì)粒兼容。

青旗生物生產(chǎn)的BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率達10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。

BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗者優(yōu)化。

6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復蘇培養基為無(wú)抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。