克隆感受態(tài)細胞的理化方法誘導細胞，吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來(lái)DNA的生理狀態(tài)。

 

　　它主要原理就是通過(guò)處理使細胞的通透性變大，直觀(guān)的說(shuō)，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進(jìn)入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動(dòng)性，這種孔洞會(huì )被細胞自身所修復。

 

　　克隆感受態(tài)細胞的制作方法：

　　CaCl2法：

　　1、將快速生長(cháng)的大腸桿菌置于經(jīng)低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會(huì )造成細胞膨脹，同時(shí)Ca2+會(huì )使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開(kāi)來(lái)，離開(kāi)所在區域，誘導細胞成為克隆感受態(tài)細胞；

　　細胞壁通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復合物。

　　聯(lián)合其它的二價(jià)金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。

　　2、此時(shí)，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會(huì )發(fā)生劇烈擾動(dòng)，并隨機出現許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進(jìn)入細胞的外源DNA分子通過(guò)復制、表達，實(shí)現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。

　　3、將轉化后的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源DNA分子的陽(yáng)性克隆。

 

　　電轉法：

　　電擊法不需要預先誘導細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進(jìn)入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡(jiǎn)便，愈來(lái)愈為人們所接受。