酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗是一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體)。即用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結果。顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

 

　　基本原理：

　　ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合，此種結合不會(huì )改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現顏色反應。因此，可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA檢測儀進(jìn)行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

 

　　特性：

　　用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩定；反應產(chǎn)物易于顯現；能商品化生產(chǎn)。如今應用較多的有辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用*。

 

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗的注意事項：

　　1、操作前應對實(shí)驗的物理參數有充分的了解，如環(huán)境溫度、反應孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

　　2、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致，否則可導致結果錯誤，實(shí)驗重復性差。

　　3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數，洗液在反應孔內滯留的時(shí)間不宜太長(cháng)。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問(wèn)污染，導致假陰性或假陽(yáng)性。

　　4、要保證加液量一致 我們在使用時(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。

　　5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強。